PROPERTIES AND SUBSTRATE SPECIFICITIES OF 2 NEURAMINIDASES FROM TRICHOMONAS FETUS

Trichomonas fetus, ein zu den Flagellaten gehörender Einzeller, verursacht bei Kühen vaginale Infektionen, die zu Frühabor-ten und zu Sterilität führen. Mittels verschiedener Methoden der Gel-, Ionenaustauscher- und Affinitätschromatographie an N-(4-Nitrophenyl)-oxamsäuresepharose 4B wurden aus dem Kul-turmedium zwei Neuraminidasen vom Molekulargewicht 320000 (Enzym I) und 38000 (Enzym II) isoliert. Dabei scheint die hochmolekulare Neuraminidase I aus zwei Isoenzymen mit vier annähernd gleich großen Untereinheiten zu bestehen. Die pH-Optima beider Enzyme variieren je nach Substrat und Puffersystem zwischen pH 4.7 und 5.5. Die MichaelisKonstanten (Km) liegen für die verschiedenen Substrate bei Enzym I zwischen 5.0 × 10-2M und 6.6 × 10-3m, bei Enzym II zwischen 1.4 × 10-2m und 4.9 × 10-3M. Unter den verschiedenen Gruppen NeuAc-halti-ger Substrate (Glycoproteine, Glycolipide, Oligosaccharide und synthetische Keioside) spaltet Neuraminidase I vorzugsweise die hochmolekularen Glycoproteine, während Enzym II höhere Affinitäten zu niedermolekularen Oligosacchariden aufweist. Die NeuAc-Bindung im Gangliosid II3NeuAc-GgOse4Cer wird von beiden Enzymen erst nach Abspaltung des lipophilen Ceramid-Restes angegriffen. Beide Enzyme zeigen gegenüber α2→3-, α2→6- und α2→8-gebundener NeuAc unterschiedliche Spezifitäten: Setzt man die Spaltungsgeschwindigkeit von II3NeuAc-Lac gleich 100, so spaltet Enzym I II6NeuAc-Lac mit 65 und II3(←2αNeuAc8)2-Lac mit 15, während Enzym II die beiden letztgenannten Substrate mit etwa 50 spaltet. Die Aktivität beider Enzyme wird durch Ca2⊕ nicht beeinflußt. Cu2⊕, Hg2⊕ und 4-Hydroxymercuri-sulfonsäure wirken als Inhibitoren. Die Hemmwirkung von Hg2⊕ und 4-Hydroxymercurisulfon-saure kann jedoch bei Enzym I durch Dithioery-thrit aufgehoben werden. © 1979 Walter de Gruyter & Co.