miR-455-5p靶向SOCS3抑制RSV感染致气道上皮炎症反应的机制研究

目的：揭示mi R-455-5p对呼吸道合胞病毒（RSV）感染致气道上皮细胞炎症反应的作用机制。方法：qRT-PCR检测30例健康体检儿童（健康组）、RSV感染轻症组（n=41）和重症组（n=31）患儿血清mi R-455-5p水平。将16HBE细胞分为Control组、NC-agomir组、mi R-455-5p-agomir组、NC-antagomir组、mi R-455-5p-antagomir组。使用Lipofectamine 3000转染16HBE细胞后培养48 h后，分为Blank组、NC组（转染了NC-agomir的细胞）、RSV+NC-agomir组、RSV+mi R-455-5p-agomir组，用RSV病毒液感染RSV+NC-agomir组和RSV+mi R-455-5p-agomir组16HBE细胞，Blank组和NC组16HBE细胞正常培养。用CCK-8法和EdU法检测细胞增殖、TUNEL法检测细胞凋亡、ELISA法检测上清液中TNF-α、IL-6、IL-8水平，qRT-PCR检测mi R-455-5p和SOCS3的m RNA水平，Western blot检测SOCS3、IFN-α、STAT1、STAT2、p-STAT1和p-STAT2的蛋白水平。结果：与健康组相比，轻症组和重症组患儿的血清mi R-455-5p水平降低（P<0.05）。与轻症组相比，重症组的血清mi R-455-5p水平降低（P<0.05）。与Control组和NC-agomir组相比，mi R-455-5p-agomir组16HBE细胞的mi R-455-5p水平、相对细胞活力和EdU阳性率升高（P<0.05）,TUNEL阳性率降低（P<0.05），上清液中的TNF-α、IL-6和IL-8水平降低（P<0.05）,SOCS3 m RNA和蛋白水平降低（P<0.05）,IFN-α蛋白、STAT1和STAT2磷酸化水平升高（P<0.05）。与Control组和NC-antagomir组相比，mi R-455-5p-antagomir组16HBE细胞的mi R-455-5p水平、相对细胞活力和EdU阳性率降低（P<0.05）,TUNEL阳性率升高（P<0.05），上清液中的TNF-α、IL-6和IL-8水平升高（P<0.05）,SOCS3 m RNA和蛋白水平升高（P<0.05）,IFN-α蛋白、STAT1和STAT2磷酸化水平降低（P<0.05）。与Blank组和NC组相比，RSV+NC-agomir组16HBE细胞的mi R-455-5p水平、相对细胞活力和EdU阳性率降低（P<0.05）,TUNEL阳性率升高（P<0.05），上清液中的TNF-α、IL-6和IL-8水平升高（P<0.05）,SOCS3 m RNA和蛋白水平升高（P<0.05）,IFN-α蛋白、STAT1和STAT2磷酸化水平降低（P<0.05）。与RSV+NC-agomir组相比，RSV+mi R-455-5p-agomir组的mi R-455-5p水平、相对细胞活力和EdU阳性率升高（P<0.05）,TUNEL阳性率降低（P<0.05），上清液中的TNF-α、IL-6和IL-8水平降低（P<0.05）,SOCS3m RNA和蛋白水平降低（P<0.05）,IFN-α蛋白、STAT1和STAT2磷酸化水平升高（P<0.05）。结论：mi R-455-5p在RSV感染患儿血清中下调，上调mi R-455-5p通过抑制SOCS3的转录和表达从而激活RSV感染的16HBE细胞中IFN-α介导的抗病毒反应。