Fine-needle aspiration cytology of thyroid nodules: molecular diagnostics in a routine diagnostic setting

Zusammenfassung Hintergrund und Fragestellung: Ergebnisse fur den Nachweis von somatischen Punktmutationen und Rearrangements in Schilddrusenknoten-Feinnadelaspirationszytologien (FNAZ) wurden bisher anhand von frischem Material gewonnen. Nach einer ersten retrospektiven Untersuchung untersuchten wir nun deren diagnostischen Nachweis prospektiv an routinema ss ig erstellten, konsekutiven, luftgetrockneten Proben. Methodik: 154 konsekutive luftgetrocknete Routine-FNAZ-Ausstrichen wurden untersucht: 80 mit mikrofollikularer Neoplasie (MFP), 45 mit follikularer Neoplasie (FN), 26 mit Verdacht auf papillares Schilddrusenkarzinom (V.a. PTC) und 3 mit Verdacht auf Malignitat. PAX8/PPARG- und RET/PTC3-Rearrangements wurden mittels quantitativer PCR nachgewiesen, wahrend BRAF- sowie RAS-Punktmutationen durch Pyrosequenzierung identifiziert wurden. Ergebnisse: Nur in 0,7% und 5,3% der FNAZ-Ausstriche war keine Analyse der Punktmutationen beziehungsweise der Rearrangements moglich. NRAS-Mutationen konnten in 7 Proben mit MFP, und je einmal bei FN bzw. V.a. PTC nachgewiesen werden; HRAS-Mutationen wurden je einmal in Proben mit MFP und FN identifiziert. Eine KRAS-Mutation wurde lediglich in einer Probe mit FN nachgewiesen. Dagegen fanden sich BRAF-Mutationen in 20 FNAZ-Ausstrichen mit V.a. PTC, aber in keinem anderen Fall. PAX8/PPARG wurde in 2 Proben mit MFP nachgewiesen (in keinem anderen Fall), wahrend RET/PTC3 nur einmal, und zwar bei MFP identifiziert wurde. Insgesamt enthielten 13,8% der MFP-FNAZ, 6,7% der FN-FNAZ und 80,8% der V.a. PTC-FNAZ eine Mutation. Folgerung: Der Nachweis von Rearrangements und Punktmutationen in Schilddrusenknoten-Feinnadelaspirationszytologien ist in einem diagnostischen Routine-Setting moglich und kann zu klinischen Konsequenzen fuhren. Abstract Background and objective: Results for the detection of point mutations and rearrangements have thus far been obtained by fresh material of fine needle aspiration cytology (FNAC). After a first retrospective study we report on the diagnostic detection in routinely obtained, consecutive air-dried FNAC smears. Methods: RNA and DNA was extracted from 154 consecutive routine air-dried FNAC smears: 80 with microfollicular proliferation (MFP), 45 with follicular neoplasia (FN), 26 with the cytological diagnosis of papillary carcinomas (PTC) and 3 which were suspicious for malignancy. PAX8/PPARG and RET/PTC3 rearrangements were detected by qPCR, while BRAF and RAS point mutations were detected by pyrosequencing. Results: Only 0.7% and 5.3% of the routine air-dried FNAC samples did not allow analysis of a point mutation or rearrangements, respectively. NRAS mutations could be detected in 7 MFP smears, and in one of FN and PTC samples, respectively. HRAS mutations were detected in one MPF and one FN sample. A KRAS mutation was only detected in one FN sample, whereas BRAF mutations were detected in 20 samples with PTC (but in no other sample). PAX8/PPARG was detected in 2 MFP samples, while RET/PTC was detected in only one MFP sample. In total, 13.8% MFP-FNAC, 6.7% FN-FNAC, and 80.8% PTC-FNAC samples harbored a mutation. Conclusion: These results demonstrate that rearrangements and point mutations can be detected in routinely obtained air-dried FNAC samples.