大鼠野生型IRF-1基因和IRF-1 shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

被引：3
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作者：
刘丽莎
刘炘
邱文
夏梅
王迎伟
机构：
[1] 南京医科大学微生物与免疫学系
来源：
南京医科大学学报(自然科学版) | 2010年 / 30卷 / 02期
关键词：
干扰素调节因子-1; 小发夹RNA; 肾小球系膜细胞;
D O I：
暂无
中图分类号：
Q781 [目的基因的获得];
学科分类号：
摘要：
目的:构建大鼠野生型干扰素调节因子1(interferon regulatory factor-1,IRF-1)基因及其特异性短发夹状小干涉RNA(shRNA)真核表达质粒,并观察IRF-1在大鼠肾小球系膜细胞(GMC)中过表达及沉默IRF-1基因的情况。方法:用DNA重组技术将针对大鼠IRF-1基因的CDS区序列和针对其不同位点所设计的3种shRNA序列分别克隆到pcDNA3.1及pGCsi.U6.neo.GFP真核表达质粒中。在酶切鉴定及序列测定正确后,用GenEscortTMⅢ转染试剂将上述两种质粒分别转染入培养的大鼠GMC中,然后用Western blot检查IRF-1融合蛋白的表达,同时筛选最佳沉默效率的shRNA。结果:限制性酶切及核酸序列分析证明,两种重组质粒均构建成功。Western blot证实构建的pcDNA3.1/IRF-1质粒在大鼠GMC中能正确表达,且IRF-1shRNA-2具有最佳沉默效率。结论:本实验成功构建了大鼠野生型IRF-1及其特异性的shRNA真核表达质粒,为进一步研究IRF-1基因的生物学功能提供了必要的实验材料。
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共 5 条
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