长链非编码RNA染色体失活特异转录本靶向调控微小RNA-106a-5p影响肾癌细胞增殖和凋亡的研究

目的探讨长链非编码RNA染色体失活特异转录本(lncRNA XIST)靶向调控微小RNA(miRNA, miR)-106a-5p对肾癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测人肾癌ACHN、Caki-1、Caki-2和786-O细胞和正常肾脏上皮细胞HK-2中XIST的表达水平。将体外培养的Caki-2细胞分为Empty组(转染空白载体)和XIST组(转染XIST过表达载体), 采用RT-qPCR检测各组细胞中XIST和miR-106a-5p的表达水平, 噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪检测各实验组细胞增殖和凋亡。采用双荧光素酶报告基因实验检测XIST和miR-106a-5p的靶向结合关系。将miR-106a-5p激动剂与XIST过表达质粒共转染后观察上调miR-106a-5p表达对XIST过表达的Caki-2细胞增殖和凋亡的影响。多组间比较使用单因素方差分析, 组间多重比较采用学生纽曼·基尔斯(Student-Newman-Keuls, SNK)-q, 两组间比较采用独立样本t检验。结果与HK2细胞比较, ACHN、Caki-1、Caki-2和786-O细胞中XIST的表达水平明显降低(相对表达量分别为0.516±0.031、0.605±0.021、0.241±0.024、0.355±0.042, t=11.666、11.321、20.321、12.992, P均<0.05)。与Empty组比较, 过表达XIST组细胞中XIST的表达水平升高(相对表达量为175.829±1.021, t=20.471, P<0.05)、细胞增殖能力降低(为对照组0.759倍, t=6.388, P<0.05)、细胞凋亡增加(为对照组1.304倍, t=11.371, P<0.05), 而细胞中miR-106a-5p的表达水平明显降低(相对表达量为0.415±0.035, t=13.717, P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-106a-5p可与XIST靶向结合。转染miR-106a-5p激动剂成功上调miR-106a-5p表达后, 过表达XIST对Caki-2细胞增殖的抑制作用及促凋亡作用明显逆转。结论过表达XIST可通过靶向调控miR-106a-5p抑制肾癌Caki-2细胞增殖并促进其凋亡。