Regulation of transcription factors c-myb and liver activator protein on expression of α1（Ⅰ） collagen gene in activated hepatic stellate cells

目的了解激活的HSC中c－myb及肝脏组织特异的转录因子－肝脏激活蛋白（liveractivatorprotein，LAP）在α1（Ⅰ）基因表达调控中的作用。方法采用链霉蛋白酶，胶原酶原位灌注、Nycodenz密度梯度离心分离大鼠HSC，并进行体外培养使之激活。构建含人α1（Ⅰ）胶原基因启动子片段（－804～＋1452或－804～＋222碱基）的荧光素酶报告基因质粒。用构建的报告基因质粒与c－myb和（或）LAP表达质粒一起，用阳离子脂质体介导的方法，瞬时共转染激活的HSC。结果瞬时共转染LAP表达质粒可明显增强含α1（Ⅰ）基因第一内含子片段的荧光素酶报告基因（PGL－col）及不含α1（Ⅰ）基因第一内含子的报告基因［PGL－col（△intron）］报告基因在HSC中的表达［荧光素酶活性分别为每毫克蛋白（587±62）U对（315±45）U及（326±52）U对（220±70）U，t值分别为10.4和3.6,两者P值均小于0.05］。C－myb对这两个报告基因均无反式激活作用。但共转染c－myb及LAP表达质粒，即使PGL－col报告基因在HSC中的表达增强近3倍［每毫克蛋白（1261±130）U对（315±45）U，t＝　20．6，P＜0.01］，而共转染反义C－myb及LAP表达质粒，却抑制了LAP对α1（Ⅰ）基因启动子的反式激活作用［每毫克蛋白（334±29）U对（315±45）U，t＝1.