HLA-E siRNA沉默肝癌细胞HLA-E基因的表达

被引：3

作者：

方天翎 ^{[1
]}

李华 ^{[2
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张彤 ^{[2
]}

曾宪成 ^{[2
]}

陈规划 ^{[2
]}

机构：

[1] 广州医学院第一附属医院肝胆外科

[2] 中山大学附属三院肝移植科

来源：

中国药理学通报 | 2010年 / 01期

基金：

中国博士后科学基金;

关键词：

小分子干扰RNA; HLA-E; 肝细胞癌; mRNA; NK; 靶向性;

D O I：

暂无

中图分类号：

R735.7 [肝肿瘤];

学科分类号：

100214 ;

摘要：

目的针对HLA-EmRNA靶序列不同位点,设计合成多个siRNA链,定量分析其对HLA-E(+)肝癌BEL-7402细胞的基因沉默效率,筛选最佳抑制效果的siRNA。方法用IFN-γ(5×105IU·L-1)诱导BEL-7402细胞表达HLA-E基因,经流式细胞技术纯化后作为靶细胞。设计并合成3条HLA-E siRNA链(A、B、C),将各siRNA(0.1mmol·L-1)经脂质体Lipofectamin 2000转染至靶细胞。采用细胞免疫荧光、流式细胞技术、Western杂交、实时PCR等定量方法,比较48h后各siRNA的基因沉默效果,并观察HLA-E基因沉默对NK肿瘤细胞杀伤的影响。结果与空白对照、非特异组相比,3组(A、B、C组)HLA-E siRNA均明显抑制细胞HLA-E抗原、蛋白产物、mRNA、细胞表面HLA-E分子的表达(P<0.01),B、C组抑制效果接近90%,高于A组(P<0.01)。A、B、C组NK肿瘤杀伤率升高(P<0.01),而B、C组肿瘤杀伤效果高于A组(P<0.01)。结论经筛选的HLA-EsiRNA能特异、高效沉默肝癌细胞HLA-E基因表达,可能抑制其非经典HLA-Ⅰ途径免疫逃避,为肝癌"基因-免疫"治疗提供新的治疗策略。

引用

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页数：4

共 5 条

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