断藤益母汤对破骨细胞RANKL信号通路及MMP-9的影响

目的:探讨断藤益母汤（DTYMD）对破骨细胞（OC）核转录因子-κB（NF-κB）受体活化因子配体（RANKL）信号通路及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的影响及其骨保护的作用机制。方法:通过诱导RAW264.7巨噬细胞建立体外破骨细胞培养体系;设空白组,模型组,DTYMD(400,600,800,1 000 mg·L;)组和甲氨蝶呤(2 mg·L;)组,然后通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色对破骨细胞进行鉴定;细胞增殖检测（CCK-8）各组细胞生存率;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测RANKL信号通路关键蛋白表达;酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组细胞MMP-9表达水平的变化。结果:TRAP染色显示,与模型组相比,DTYMD 400,600 mg·L;组融合细胞数量有所减少,但差异无统计学差异;DTYMD 800,1 000 mg·L;组融合细胞数目显著减少（P<0.01）。CCK-8结果显示,与模型组比较,DTYMD 600,800,1 000 mg·L;组和甲氨蝶呤2 mg·L;组生存率明显下降（P<0.05,P<0.01）。Western blot结果显示,与模型组相比,DTYMD 1 000 mg·L;组、甲氨蝶呤2 mg·L;组中RANKL蛋白表达有所下降（P<0.05）。DTYMD各组中的OPG蛋白表达水平无明显变化。ELISA结果显示,与模型组相比,DTYMD各组及甲氨蝶呤组中的MMP-9表达水平均有所下降,且DTYMD质量浓度越高,下降越明显（P<0.05,P<0.01）。结论:断藤益母汤可能是通过下调RANKL和MMP-9的表达以及抑制破骨细胞的分化和增殖而起到骨保护作用。