应用转基因技术体外培养表达人碱性成纤维细胞生长因子的视网膜色素上皮细胞

目的　探讨应用转基因技术体外培养稳定表达人碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞的可行性。方法　构建以绿色荧光蛋白 (greenfluorescentprotein ,GFP)作为标记基因的人bFGF真核表达载体pcFG。应用脂质体介导法转染人RPE细胞 ,以G4 18筛选出表达bFGF的RPE细胞 ,并进行细胞克隆 ,传代培养 4周。于荧光显微镜下观察GFP的表达情况 ,用原位杂交和免疫组织化学染色法检测bFGF在RPE细胞的表达情况。结果　酶切结果证实含有GFP的真核表达载体pcFG构建正确。在荧光显微镜下可见RPE细胞表达绿色荧光蛋白。经原位杂交和免疫组织化学染色证实 ,转染pcFG后的RPE细胞内有大量bFGF mRNA的转录蛋白表达。结论　应用转基因技术可体外培养稳定表达bFGF的RPE细胞。