let-7g对小鼠乳腺发育和泌乳相关功能基因Tgfbr1的作用及其机理

运用生物信息学方法对let-7g进行靶基因预测,构建含有与其结合位点互补序列的荧光素酶报告质粒将其与phRL-TK及let-7g mimics或negative control共转染小鼠乳腺上皮细胞,双荧光素酶报告系统检测试剂盒测定荧光素酶的表达;用let-7ginhibitor和let-7g mimics或negative control分别转染小鼠乳腺上皮细胞,并应用细胞活力分析技术、qRT-PCR技术、Western blotting、HPLC分析let-7g的表达变化及其对小鼠乳腺上皮细胞的影响。结果显示:经酶切及测序证实荧光素酶报告质粒构建成功;将荧光素酶报告基因、phRL-TK与let-7g mimics共转染小鼠乳腺上皮细胞,荧光素酶活性与对照组(即共转染荧光素酶报告基因、phRL-TK与Negative Control的小鼠乳腺上皮细胞组)相比显著降低(P<0.05);与阴性对照组和空白对照组相比较,let-7g inhibitor转染后,TGFβRⅠ蛋白表达量显著增加(P<0.01),细胞活性显著增强(P<0.05),β-酪蛋白表达量增加(P>0.05),而let-7g mimics转染后,TGFβRⅠ蛋白表达量显著减少(P<0.01),细胞活性显著降低(P<0.05),β-酪蛋白表达量显著减少(P<0.05)。结果表明,在小鼠乳腺上皮细胞中,let-7g能够靶向结合Tgfbr1,且负调控其表达;let-7g可通过抑制靶蛋白TGFβRⅠ的表达,进而调控小鼠乳腺上皮细胞的增殖及β-酪蛋白的分泌。