人视网膜色素上皮细胞的冻存和复苏培养

目的：建立人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞的冻存和复苏方法。方法：根据慢冻速融的细胞冻存原则，将原代或传代１～２次培养的人ＲＰＥ细胞，加入１０％二甲基亚砜作为保护剂，液氮中冻存。复苏时将冻存细胞在６０℃、２分钟内融化，用台盼蓝染色测定细胞存活率，用抗人角蛋白抗体免疫细胞化学染色作细胞鉴定，每日计算细胞数以确定细胞生长曲线。结果：经冻存复苏后的ＲＰＥ细胞的存活率达９０％，生长状态与对照组无差异，抗人角蛋白染色阳性，细胞对数生长期在１～４天，群体细胞倍增期约为１．５５天。结论：人ＲＰＥ细胞液氮冻存可保持生物活性，复苏后生长良好，保持了细胞特征。这可提供细胞系，方便了体外实验，并可能作为ＲＰＥ细胞移植治疗一些眼底病的细胞库。