miR-20a-5p靶向KDM6B对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨miR-20a-5p、赖氨酸脱甲基酶6B(KDM6B)在骨肉瘤组织中的表达及miR-20a-5p靶向KDM6B对骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭及肿瘤生长的影响。方法收集2017年1月至2019年3月在中国医科大学附属第一医院接受治疗的20例骨肉瘤患者的临床病理标本和癌旁组织, 采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测组织中miR-20a-5p及KDM6B mRNA表达水平。将骨肉瘤MG63细胞分为空白对照组、mimic NC组、miR-20a-5p mimic组和NC+空载体组、miR-20a-5p+空载体组、miR-20a-5p+KDM6B组, 采用qRT-PCR检测各组细胞miR-20a-5p和KDM6B mRNA表达水平, 蛋白质印迹法检测KDM6B蛋白的表达水平, CCK-8法、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。按照随机数字表法将裸鼠分为NC+空载体组、miR-20a-5p+空载体组和miR-20a-5p+KDM6B组, 每组各5只, 采用裸鼠移植瘤模型检测肿瘤细胞的生长能力。结果骨肉瘤组织中miR-20a-5p mRNA相对表达量为0.55±0.27, 癌旁组织为1.22±0.28, 差异具有统计学意义(t=7.701, P<0.001);骨肉瘤组织中KDM6B mRNA相对表达量为1.66±0.19, 癌旁组织为1.00±0.15, 差异具有统计学意义(t=12.219, P<0.001)。转染miR-20a-5p后, KDM6B mRNA和蛋白表达水平均随miR-20a-5p表达水平的升高而降低。转染miR-20a-5p 48 h后, 空白对照组、mimic NC组、miR-20a-5p mimic组细胞增殖能力分别为0.83±0.04、0.81±0.03、0.52±0.01(F=89.655, P<0.001), 与空白对照组、mimic NC组相比, miR-20a-5p mimic组均受到明显抑制(均P<0.001);NC+空载体组、miR-20a-5p+空载体组、miR-20a-5p+KDM6B组细胞增殖能力分别为0.83±0.05、0.52±0.01、0.67±0.05(F=43.919, P<0.001), 与NC+空载体组相比, miR-20a-5p+空载体组受到明显抑制(P<0.001), 与miR-20a-5p+空载体组相比, miR-20a-5p+KDM6B组显著增强(P<0.001)。空白对照组、mimic NC组、miR-20a-5p mimic组划痕愈合率分别为(32.51±2.73)%、(30.26±3.22)%、(13.52±1.77)%(F=46.314, P<0.001), 与空白对照组、mimic NC组相比, miR-20a-5p mimic组均显著降低(均P<0.001);NC+空载体组、miR-20a-5p+空载体组、miR-20a-5p+KDM6B组划痕愈合率分别为(31.34±3.11)%、(12.15±1.64)%、(28.93±2.89)%(F=47.511, P<0.001), 与NC+空载体组相比, miR-20a-5p+空载体组显著降低(P<0.001), 与miR-20a-5p+空载体组相比, miR-20a-5p+KDM6B组显著增强(P=0.001)。空白对照组、mimic NC组、miR-20a-5p mimic组穿膜细胞数分别为114±16、108±11和42±6(F=36.282, P<0.001), 与空白对照组、mimic NC组相比, miR-20a-5p mimic组均显著减少(均P<0.001);NC+空载体组、miR-20a-5p+空载体组、miR-20a-5p+KDM6B组穿膜细胞数分别为143±11、39±4、139±12(F=112.120, P<0.001), 与NC+空载体组相比, miR-20a-5p+空载体组显著减少(P<0.001), 与miR-20a-5p+空载体组相比, miR-20a-5p+KDM6B组显著增多(P<0.001)。NC+空载体组、miR-20a-5p+空载体组、miR-20a-5p+KDM6B组小鼠第21天肿瘤体积分别为(1 667.50±250.40)mm3、(129.20±21.00)mm3、(775.41±77.51)mm3, 差异具有统计学意义(F=77.651, P<0.001);3组小鼠肿瘤重量分别为(1.35±0.18)g、(0.12±0.01)g、(0.61±0.03)g, 差异具有统计学意义(F=104.191, P<0.001)。结论 miR-20a-5p在骨肉瘤组织中表达显著下降, KDM6B在骨肉瘤组织中表达显著升高, 过表达miR-20a-5p可能通过靶向降低KDM6B的表达来抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及肿瘤生长能力。