L'TABLISSEMENT D'UN MODLE CELLULAIRE DE L'OLIGONUCLOTIDE MUTANT

Objectif Pour etablir un modele cellulaire de I’oligonucleotide mutant. Methodes Par rap- port la prise du gene de la proteine de fluorescence verte et agrandisse (EGFP) , nous induissons une mutation par la technique du point mutant de PCR pour changer du codon de 98eme position du gene egfp GAA au codon d’arret TAA, formant le gene egfp-D de mutant, donc on construit deux vecteurs de plasmides : pcDNA3-egfp et pcDNA3-egfp-D. Puis les plasmides sont transferes dans les cellules NIH-3T3 par le calcium de phosphate. Resultats Sous le microscope de fluorescence, on n’a pas vu I ’expression de la EGFP dans tous les cellules transferees par l’egfp-D de mutant, et en meme temps, les cellules transferees par l’egfp normal peuvent exprimer la EGFP. Ensuite on obtient les cellules stables par le criblage de G418. PCR confirme I’integration du gene egfp-D dedans le genome ADN des cellules. RT-PCR et Northern blot analysent les genes egfp et egfp-D peuvent transcrire normalement, il montre les cellules transferees par le gene egfp-D de mutant n’exprimant pas la fluorescence verte est parce que la traduction est terminee en avant. Conclusion Le modele cellulaire de I’oligonucleotide mutant rapporte par le gene egfp est etabli avec succes, ce modele peut employer en recherche du systeme reparant therapeutique via le chi-meric ARN /ADN oligonucleotide(RDOs).