Thanatin突变体在大肠杆菌中的表达及纯化

被引：4

作者：

顾林 ^{[1
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文良柱 ^{[1
]}

吴国球 ^{[2
]}

徐寒梅 ^{[1
]}

沈子龙 ^{[1
]}

机构：

[1] 中国药科大学生物技术中心

[2] 东南大学附属中大医院检验科

来源：

东南大学学报(医学版) | 2007年 / 03期

关键词：

thanatin; 突变体; 大肠杆菌; 融合蛋白; 纯化; 表达; 药敏试验;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

目的:在大肠杆菌中克隆表达thanatin突变体(Th-T)蛋白并纯化。方法:PCR合成Th-T基因并克隆到pET32a载体的BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点之间,构建Th-T原核表达载体(pET32a-Th-T)并转化到大肠杆菌BL21融合表达,通过正交实验优化表达条件,His-Bind介质纯化。考察经酶切纯化后的重组Th-T对4种供试菌的最低抑制浓度。结果:菌体在LB培养基(pH6.5)培养4.5 h,IPTG 0.4 mmol.L-1诱导7 h,Th-T融合蛋白大量可溶性表达,经药敏试验证明纯化的重组Th-T具有预期的抗菌活性。结论:本研究为通过大肠杆菌体系表达重组Th-T抗菌药物奠定了基础。

引用

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