阿尔茨海默病患者β淀粉样肽40人单链抗体在大肠杆菌的表达和纯化

目的:重组表达并纯化抗β淀粉样肽40的人单链抗体,为被动免疫治疗阿尔茨海默疾病提供研究材料。方法:实验于2004-08/2005-03在核医学实验室完成。自制人单链抗体基因。将从人噬菌体单链抗体文库中筛选获得的抗β淀粉样肽40人单链抗体基因,克隆到pET22b(+)质粒,转化BL21-gold大肠杆菌,经0.5mmol/L异丙基硫代-β-D半乳糖苷诱导表达抗β淀粉样肽40的人单链抗体。采用Ni2+-NTA-树脂柱亲和纯化尿素变性的包涵体内表达产物,经柱上复性,含咪唑缓冲液洗脱获得人单链抗体。应用Westernblot和酶联免疫吸附实验鉴定纯化的抗β淀粉样肽40的人单链抗体。用Branford法测定纯化抗体的浓度。结果:①抗β淀粉样肽40人单链抗体基因长度约为750bp,重组表达产物相对分子质量33000。②经过一次亲和柱纯化,从细菌包涵体中纯化出高纯度的抗β淀粉样肽40人单链抗体。③酶联免疫吸附实验分析表明纯化单链抗体和β淀粉样肽40结合的A595nm高于对照,差异显著(0.59±0.06,0.12±0.02,P<0.05),表明从包涵体中纯化出来β淀粉样肽40人单链抗体保持了结合抗原的免疫活性。纯化β淀粉样肽40人单链抗体浓度为96mg/L。结论:抗β淀粉样肽40的人单链抗体在大肠杆菌系统得以重组表达,利用亲和层析成功获得高纯度的重组单链抗体。