Nectin-3序列初步分析及其表达定位

被引：0

作者：

刘向远 ^{[1
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王鑫瑶 ^{[1
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孙雪娇 ^{[1
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陈宇 ^{[1
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钟子琳 ^{[1
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陈建军 ^{[1
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机构：

[1] 同济大学附属上海市第四人民医院儿科

[2] 同济大学附属上海市第四人民医院脑功能与人工智能转化研究所

来源：

同济大学学报(医学版) | 2021年 / 42卷 / 06期

基金：

国家重点研发计划;

关键词：

Nectin-3; 剪接变体; 亚细胞定位;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q811.4 [生物信息论];

学科分类号：

0711 ; 0831 ;

摘要：

目的初步分析人的细胞黏附蛋白Nectin-3(nectin cell adhesion molecule 3)的序列并研究其亚细胞定位,观察小鼠Nectin-3眼部表达情况。方法分析Nectin-3核苷酸序列并对其编码的3个同源异构体进行氨基酸序列比对分析。构建带eGFP荧光标签的Nectin-3 3个同源异构体的重组质粒,转染到HEK293T细胞内,Western印迹法实验检测其蛋白表达。分别转染至HeLa细胞内,细胞免疫荧光检测其亚细胞定位。免疫组织化学实验检测Nectin-3在新生小鼠眼球组织的表达情况。结果 Nectin-3在目前数据库中共有的转录本有3个,分别编码3个同源异构体iso1(isoform1)、iso2(isoform2)和iso3(isoform3)。序列分析显示它们的N端和/或C端氨基酸序列不同,编码iso3的基因的启动子与iso1和iso2的启动子不同。成功构建Nectin-3的3个同源异构体的荧光融合蛋白表达质粒,Western印迹法显示iso1和iso2的融合蛋白均出现比预测的分子量更小的条带,iso3的融合蛋白与预测的分子量大小基本一致。免疫荧光实验显示iso3表达主要在细胞质中,iso1与iso2表达在细胞核和细胞质均可见;免疫组织化学显示Nectin-3在晶状体上皮细胞和纤维细胞、视网膜上皮细胞和睫状体色素和非色素上皮细胞之间区域均有表达。结论 Nectin-3在新生小鼠眼球组织表达,iso1与iso2可能被酶切割,3个同源异构体的亚细胞定位存在差异,这些实验数据将为后续研究Nectin-3的功能奠定实验基础。

引用

页码：760 / 766

页数：7

共 18 条

[1] Noncoding RNAs regulate alternative splicing in Cancer [J].

Liu, Yunze ;

Liu, Xin ;

Lin, Changwei ;

Jia, Xianhong ;

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Song, Jun ;

Zhang, Yi .

JOURNAL OF EXPERIMENTAL & CLINICAL CANCER RESEARCH, 2021, 40 (01)

[2]

Nectin-3 (CD113) interacts with Nectin-2 (CD112) to promote lymphocyte transendothelial migration[J] . Elisabeth Devilard,Luc Xerri,Patrice Dubreuil,Marc Lopez,Nicolas Reymond.PLoS ONE . 2017 (10)

[3] Functional defects in Clostridium difficile TcdB toxin uptake identify CSPG4 receptor-binding determinants [J].