云南松胚乳DNA提取与ISSR-PCR反应体系的建立

以云南松胚乳为试验材料,用改进的SDS法进行DNA的提取,并对其纯度、浓度及产率进行检测,结果表明:DNA扩增效果良好,完全能满足进一步试验的需要;采用单因子试验分析法分别研究模板DNA浓度、引物浓度、Mg2+浓度、TaqDNA聚合酶用量、dNTP浓度、退火温度对反应体系的影响,建立并优化云南松ISSR-PCR 20μL反应体系:buffer(10 mmol/L Tris-HCl,50 mmol/L KCl,0.1%Triton X-100 pH 9.0),0.3μmol/L引物,1.5 m mol/L MgCl2,0.5 U TaqDNA聚合酶,0.2 mmol/L dNTPs,30 ng模板DNA,引物(GA)8的最适退火温度为52.5℃。