人LC3B基因的真核表达及鉴定

被引：0

作者：

董倩 ^{[1
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徐小洁 ^{[2
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纪贝贝 ^{[1
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范忠义 ^{[1
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梁迎春 ^{[2
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王涛 ^{[2
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叶棋浓 ^{[2
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胡毅 ^{[1
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机构：

[1] 解放军总医院肿瘤内一科

[2] 军事医学科学院生物工程研究所

来源：

生物技术通讯 | 2015年 / 26卷 / 05期

基金：

北京市自然科学基金;

关键词：

人LC3B; 克隆; 真核表达;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

目的:构建带HA标签的重组人LC3B基因的真核表达载体,获得HA-LC3B融合蛋白,并初步检测其生物学功能。方法:从人乳腺文库中通过PCR技术扩增LC3B基因编码序列,将其插入pc DNA3.0-HA载体,获得HA-LC3B真核表达载体;将重组质粒与空载体分别转染人胚肾293T细胞,通过Western印迹检测转染细胞的表达情况,免疫共沉淀实验证实其生物学活性。结果:双酶切和测序结果表明HA-LC3B真核表达质粒构建成功,Western印迹表明重组质粒转染293T细胞后获得表达;免疫共沉淀实验显示HA-LC3B融合蛋白可以和Atg4B蛋白相互作用,具有较好的生物学活性。结论:在真核表达系统中表达了带HA标签的人LC3B,为进一步研究细胞自噬奠定了基础。

引用

页码：652 / 654

页数：3

共 5 条

[1] 人自噬相关基因LC3B原核表达载体的构建及活性检测
黄蓉
徐小洁
梁迎春
王涛
冯滢滢
周丽英
李玲
冀全博
郭靖
叶棋浓
杜楠
[J]. 军事医学, 2014, (11) : 867 - 870
[2] 细胞自噬与肿瘤
李玲
徐小洁
叶棋浓
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