人IL-26的基因克隆及其真核表达载体的构建

被引：0

作者：

刘义庆 ^{[1
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王来城 ^{[2
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焦玉莲 ^{[2
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张捷 ^{[2
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马春燕 ^{[2
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崔彬 ^{[2
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高新谱 ^{[2
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刘正敏 ^{[2
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张雪 ^{[2
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赵跃然 ^{[1
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机构：

[1] 不详

来源：

山东大学学报(医学版) | 2006年 / 06期

关键词：

白细胞介素26; 基因克隆; COS7细胞; 真核表达载体;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

目的:克隆人白细胞介-素26(human interleukin-26,hIL-26)基因,构建其真核表达载体并探讨在真核细胞中的表达。方法:提取人外周血单个核细胞总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增hIL-26基因;目的片段与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌E.coli-DH5α,菌落PCR、酶切分析和DNA序列分析鉴定重组克隆。用SalⅠ和EcoRⅠ将目的片段切下,插入pIRES2-EGFP的相应位点,构建表达载体pIRES2-EGFP/hIL-26并进行酶切鉴定。将重组质粒用非脂质体试剂Fugene 6转染至COS7细胞中。结果:重组克隆载体pMD18-T/hIL-26内插入片段序列与GenBank上报道的hIL-26基因序列完全一致;pIRES2-EGFP/hIL-26经酶切鉴定与预期结果一致;荧光显微镜观察可见转染后的细胞有荧光出现,Western blotting鉴定证明hIL-26基因得到了有效表达。结论:成功构建了hIL-26基因的真核表达载体并在真核细胞中获得了有效表达。

引用

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