和血柔肝方对肝纤维化大鼠SphK1/S1P/S1PR信号通路的影响

目的 观察和血柔肝方对肝纤维化大鼠SphK1/S1P/S1PR信号通路相关因子表达的影响，探讨其治疗肝纤维化的作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组和造模组，造模组大鼠每周2次颈背部皮下注射60%CCl4溶液（CCl4∶橄榄油=3∶2），剂量3 mL/kg，连续12周，复制肝纤维化大鼠模型。造模成功后，将造模组大鼠随机分为模型组、秋水仙碱组及和血柔肝方低、中、高剂量组，每组10只。各给药组分别予相应药液灌胃，对照组和模型组予等体积蒸馏水，每日1次，连续4周。给药结束后分别检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）,HE染色观察大鼠肝组织病理变化，RT-PCR检测大鼠肝组织鞘氨醇激酶1(SphK1)、1-磷酸鞘氨醇受体3(S1PR3)、细胞外信号调节激酶1(ERK1)、第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因（PTEN）、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)及转化生长因子-β（TGF-β）m RNA表达，Western blot检测大鼠肝组织SphK1、S1PR3、ERK1、PTEN和TGF-β蛋白表达。结果 与对照组比较，模型组大鼠体质量、肝质量、肝系数和脾系数显著降低（P<0.01,P<0.05），血清ALT、AST含量显著增加（P<0.01），肝脏呈深褐色、无光泽，肝体缩小，包膜粗糙，散在大小不等的结节，肝小叶结构破坏，汇管区和中央静脉间有明显桥接纤维间隔形成，并伴有少量炎性细胞浸润，肝组织TGF-β、Sph K1、TRAF2、PTEN、ERK1和S1PR3 mRNA表达显著升高（P<0.01,P<0.05）,TGF-β、SphK1、PTEN、ERK1、S1PR3蛋白表达显著升高（P<0.01,P<0.05）；与模型组比较，各给药组大鼠体质量、肝质量、肝系数、脾质量和脾系数差异无统计学意义（P>0.05），和血柔肝方高剂量组大鼠肝脏形态和肝小叶结构改善，纤维间隔明显减少，炎性细胞浸润减少，和血柔肝方各剂量组大鼠肝组织TGF-β、Sph K1、TRAF2、PTEN、ERK1和S1PR3 mRNA表达显著降低（P<0.01）,TGF-β、SphK1、PTEN、ERK1、S1PR3蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论 和血柔肝方可减轻CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝脏炎症及纤维化状态，尤以和血柔肝方高剂量组疗效显著，其可能通过抑制Sph K1/S1P/S1PR信号轴活化状态、减少TGF-β产生，发挥治疗肝纤维化的作用。