重组抗菌肽S-thanatin的表达纯化及不同MIC鉴定方法对其结果的影响

目的:获得重组抗菌肽S-thanatin(Ts)在大肠杆菌的可溶性表达及分离纯化方法,通过不同方法鉴定Ts的最低抑菌浓度(MIC),揭示不同方法对结果的影响。方法:利用基因重组手段构建表达质粒pET32a-Ts,转化大肠杆菌BL21(DE3),可溶性表达Ts融合蛋白,利用镍柱亲和层析纯化出融合蛋白,透析以后经凝血酶酶切,再通过葡聚糖凝胶G-50纯化除去融合伴侣TRX,最后冻干精制得到Ts冻干粉。利用玻璃管的常量肉汤稀释法、聚苯乙烯和聚丙烯96孔板的微量肉汤稀释法和MH琼脂打孔法测定阳离子肽Ts的抑菌活性。结果:Ts在大肠杆菌中成功可溶性表达并获得85%以上纯度的目的蛋白。不同测定方法显示,Ts对同一菌株具有不同的MIC,以常量肉汤稀释法和聚丙烯96孔板的微量肉汤稀释法测定的多肽抑菌活性效果最佳。结论:Ts在工程菌BL21(DE3)中得到高表达,纯化出后具有较高的抑菌生物活性。不同方法测定出差异化MIC表明,阳离子肽Ts的抑菌活性易受实验材料材质影响。