人乳头状瘤病毒16亚型E6E7基因重组腺病毒的构建及其在小鼠骨髓源树突状细胞中的表达

被引：5

作者：

焦庆昉 ^{[1
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潘巍巍 ^{[1
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易发平 ^{[1
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卜友泉 ^{[1
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刘革力 ^{[1
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陈全 ^{[1
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朱勇 ^{[1
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宋方洲 ^{[1
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机构：

[1] 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心

[2] 重庆医科大学免疫教研室

[3] 重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室

来源：

中国生物制品学杂志 | 2011年 / 24卷 / 01期

关键词：

乳头状瘤病毒科; E6E7基因; 腺病毒科; 树突细胞;

D O I：

10.13200/j.cjb.2011.01.31.jiaoqf.029

中图分类号：

R737.33 [子宫肿瘤];

学科分类号：

100214 ;

摘要：

目的构建人乳头状瘤病毒16亚型(Human papillomavirus 16,HPV16)E6E7基因重组腺病毒,并在小鼠骨髓源树突状细胞(Dendritic cell,DC)中表达。方法双酶切质粒pET-32a(+)-E6E7获得E6E7,基因片段,插入腺病毒穿梭质粒pAd-Track-CMV中,转染HEK293细胞,扩增病毒,经同源重组、包装后获得重组腺病毒pAd-E6E7,转染体外培养的小鼠骨髓源DC,激光共聚焦显微镜观察转染的小鼠DC的形态,流式细胞术检测转染前后小鼠DC表面标志物(CD40、CD86、MHCⅡ和CD11C),Western blot检测E6蛋白的表达。结果双酶切及测序证实,重组腺病毒质粒pAd-E6E7构建正确,插入的E6E7基因片段序列正确;转染HEK293细胞48 h,倒置荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的表达,重组腺病毒的滴度为3×107 CCID50/ml;重组腺病毒pAd-E6E7感染后DC的状态与成熟DC表面标志物(CD40、CD86、MHCⅡ和CD11C)相符合,感染后的DC表面有许多树枝状、刺状突起,符合成熟DC的表面形态;感染后的DC中存在E6蛋白的表达。结论已成功构建了HPV16 E6E7基因重组腺病毒表达质粒,其能在小鼠骨髓源DC中表达。

引用

页码：25 / 29

页数：5

共 10 条

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