miR-21表达与胃癌细胞阿帕替尼敏感性关系的实验研究

目的探讨miR-21表达与胃癌细胞对阿帕替尼敏感性的关系以及可能作用机制。方法体外培养人胃癌AGS细胞和耐药AGSAR细胞,分别转染miR-21 inhibitor或miR-21 mimics。采用荧光定量PCR(QPCR)检测AGS和AGSAR细胞miR-21表达水平;QPCR检测不同浓度(0、2、5、10μmol/L)阿帕替尼对AGS和AGSAR细胞p-VEGFR2和p-Akt mRNA表达水平的影响,以及不同miR-21表达对AGS和AGSAR细胞p-VEGFR2、p-Akt、PTEN mRNA表达水平的影响;采用MTT法和划痕实验检测阿帕替尼对AGS、AGSAR细胞增殖和迁移的影响。结果 AGS细胞中miR-21、p-VEGFR2和p-Akt表达量分别为0.82±0.09、0.73±0.09和0.68±0.08,均高于AGSAR的0.35±0.10、0.33±0.07和0.25±0.04,差异有统计学意义(P<0.05);经阿帕替尼处理后,AGSAR细胞的增殖和迁移活性明显高于AGS细胞(P<0.05)。10μmol/L阿帕替尼处理24 h后,阴性对照组AGS细胞的存活率和迁移距离分别为(39.48±7.45)%和(70.44±11.57)μm,明显低于miR-21 inhibitor转染AGS细胞的(80.63±8.27)%和(108.46±10.39)μm,差异有统计学意义(P<0.05);阴性对照组AGSAR细胞存活率和迁移距离(78.82±8.14)%和(93.15±9.86)μm,明显高于miR-21 mimics转染AGSAR细胞的(29.95±6.74)%和(61.43±9.85)μm,差异有统计学意义(P<0.05)。转染miR-21 inhibitor后,AGS细胞中p-VEGFR2和p-Akt mRNA相对表达水平分别为1.12±0.13和0.82±0.10,明显高于阴性对照组的0.73±0.11和0.64±0.11,而PTEN mRNA表达水平则下调(0.18±0.04 vs.0.51±0.08),差异均有统计学意义(P<0.05)。转染miR-21 mimics后,AGSAR细胞p-VEGFR2和p-Akt mRNA相对表达水平分别为0.17±0.04和0.12±0.03,明显低于阴性对照组的0.30±0.04和0.25±0.02,而PTEN mRNA表达水平则上调(0.53±0.06 vs.0.44±0.03),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论上调miR-21表达可增加VEGFR-2和Akt磷酸化水平,从而提高胃癌细胞对阿帕替尼的敏感性。