miR-519d通过靶向基因表达抑制非小细胞肺癌增殖作用及其机制的研究

目的 探究miR-519d对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖作用的影响及其潜在的作用机制。方法 通过对芯片GSE19945的中NSCLC癌和癌旁组织中不同miRNA的差异表达,Starbase(http：//starbase.sysu.edu.cn)数据分析CC趋化因子受体7(CC chemokine receptor 7, CCR-7)在NSCLC患者中的表达,预后miR-519d以及CCR-7两者的相关性。生物信息方法miR-519d与CCR-7潜在的结合位点。实时定量PCR检测A549细胞中转染miR-519d后miR-519d的表达；通过CCK-8检测不同表达miR-519d对于A549细胞活性的影响,克隆形成以及Ki67检测过表达或者低表达miR-519d后对于A549细胞增殖能力的影响。荧光素酶报告验证CCR-7与miR-519d的靶向作用。采用应用免疫蛋白印迹(Western blot)检测不同表达miR-519d后A549细胞中PCNA、Bax以及CCR-7蛋白的表达。结果 对于芯片GSE19945结果分析,发现miR-519d在癌症组织中明显低表达(P＝0.045),在NSCLC中miR-519d表达明显高于正常组织；低表达miR-519d的患者生存率明显高于高表达miR-519d的NSCLC患者(P＝0.009),同时,CCR-7在NSCLC患者组织中的表达明显升高,低表达CCR-7的患者生存率明显高于过表达CCR-7的NSCLC患者,且miR-519d与CCR-7在NSCLC患者中表达呈负相关。高表达miR-519d后,A549细胞活性相对于阴性对照组明显降低(P＝0.043),而低表达miR-519d后活性明显升高(P＝0.031)。过表达miR-519d后A549细胞增殖能力相对于阴性对照组明显降低。生物信息学结果显示miR-519d与CCR-7有潜在的结合位点。Western blot结果表明,不同表达的miR-519d能够影响增殖相关蛋白PCNA以及Bax表达(P＝0.029、0.031)。过表达miRNA-519d后CCR-7表达相对于阴性对照组明显降低(P＝0.038、0.027),而低表达miRNA-519d后,CCR-7表达明显升高(P＝0.043、0.030),同时荧光素酶报告结果显示,CCR-7是miRNA-519d的直接作用靶点(P＝0.031)。结论 miR-519d能通过靶向调控CCR-7基因的表达进而调控NSCLC细胞增殖,同时miR-519d也是NSCLC患者预后的一个相关因子,本实验结果为miR-519d成为预防、诊断和治疗NSCLC的潜在靶点提供了理论依据。