家蝇Cecropin基因的原核表达及表达产物的免疫学鉴定附视频

被引：1

作者：

王炜

郑学礼

机构：

[1] 南方医科大学公共卫生与热带病学院病原生物学系

来源：

中国人兽共患病学报 | 2009年 / 05期

关键词：

家蝇; Cecropin; 多克隆抗体; 融合表达;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

目的克隆家蝇抗菌肽基因Cecropin A,进行原核表达,制备兔抗家蝇幼虫血清鉴定表达产物。方法在GenBank中检索家蝇Cecropin A基因序列,设计特异性引物,从家蝇幼虫组织总RNA中RT-PCR扩增Cecropin A成熟肽(Ma-tureCecropin,MC)基因,克隆入原核表达载体pET32a中,并转化大肠埃希菌BL21(DE3)。经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白。用家蝇幼虫匀浆液免疫家兔,获得多抗血清,双向琼脂扩散实验鉴定多克隆抗血清的效价。Western blotting鉴定纯化后的重组蛋白质。结果重组蛋白质Thiore-doxin(硫氧还蛋白,Trx)-MC,经兔抗家蝇幼虫血清鉴定正确。结论天然MC在原核表达系统中得到正确表达。

引用

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