低剂量脂多糖诱导PC12细胞中Nrf2的表达及其抗ROS作用的实验研究

目的研究低剂量脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的PC12细胞中核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor-2,Nrf2)的表达及其抗活性氧(reactive oxygen species,ROS)的作用。方法分别以浓度为0.01、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1μg/μl的LPS刺激PC12细胞24 h,MTT法检测细胞活性确立对细胞没有毒性作用的最大安全剂量;采用此剂量刺激PC12细胞,RT-PCR、Western blot检测细胞内Nrf2 mRNA、总蛋白及细胞质、细胞核内Nrf2蛋白的表达;流式细胞仪检测LPS处理8 h细胞内ROS的平均荧光强度。结果 LPS浓度小于0.1μg/μl对细胞没有明显毒性作用(P>0.05);采用0.1μg/μl LPS刺激PC12细胞,24 h内细胞内Nrf2 mRNA及总蛋白表达逐渐升高,其中18 hmRNA及24 h mRNA和总蛋白与空白对照组比较差异显著(P<0.01),12 h内胞质Nrf2蛋白表达先降低后似有恢复趋势,6 h最低(P<0.01),胞核蛋白表达升高,各时相组与空白对照组比较差异显著(P<0.01),3 h达到峰值;0.1μg/μlLPS刺激的8 h,PC12细胞内ROS的平均荧光强度明显减弱(P<0.01)。结论低剂量LPS具有时间依赖性方式促进PC12细胞内Nrf2转录、翻译和核转位的作用,下调细胞内ROS表达水平,并可能藉此参与应激耐受。