三七总皂苷通过抑制槟榔碱诱导的HaCaT细胞铁死亡减轻口腔黏膜下纤维化

目的：探讨三七总皂苷（PNS）是否通过调控铁死亡减轻槟榔碱（ANE）诱导的口腔黏膜下纤维化（OSF），并初步研究其机制。方法：采用ANE作用于人永生化角质形成细胞系HaCaT构建OSF模型，设置空白组，模型组（50 mg/L ANE），低、中、高剂量（12.5、25和50 mg/L）PNS组，以及liproxstatin-1（铁死亡抑制剂）组，共计6组。光镜观察HaCaT细胞形态学变化；CCK-8法检测细胞活力；Western blot检测细胞中Ⅰ型胶原（Col-Ⅰ）、溶质载体家族7成员11（SLC7A11）和谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）的蛋白表达水平；透射电镜观察细胞线粒体形态学变化；FerroOrange荧光探针检测细胞Fe2+水平；DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）含量；比色法检测细胞内谷胱甘肽（GSH）含量。结果：与空白组比较，模型组HaCaT细胞多数呈长梭形，纤维化样外观，贴壁不牢靠，形态学改变显著，电镜下线粒体双层膜密度增加，嵴显著减少，呈典型的铁死亡表现，Col-Ⅰ蛋白表达增加，GPX4和SLC7A11蛋白表达降低，Fe2+和ROS水平升高，GSH含量降低（均P<0.05）；与模型组相比，低、中、高剂量PNS组细胞多数恢复圆润，呈上皮细胞样，线粒体膜密度减小，嵴数目增加，形态趋于正常，Col-Ⅰ蛋白表达减少，ROS水平下降，GSH含量升高（均P<0.05）；与模型组相比，中、高剂量PNS组GPX4和SLC7A11蛋白表达显著上升，Fe2+含量显著降低（均P<0.05）;liproxstatin-1组细胞和线粒体形态及各指标水平与高剂量PNS组相比无显著差异（均P>0.05）。结论：PNS可通过抑制ANE诱导的HaCaT细胞铁死亡减轻OSF。