miR-665靶向BCL2L11调控武安山羊成肌细胞增殖

旨在利用分子生物学方法探究miR-665靶向调控BCL2L11对山羊成肌细胞增殖的影响。本研究选取1月龄和9月龄的健康山公羊各3只，各年龄段体重均接近且饲养环境相同。本试验通过RT-qPCR分析BCL2L11在武安山羊不同组织中的表达情况；利用RT-qPCR检测了不同月龄武安山羊背最长肌组织中BCL2L11和miRNA-665的表达情况；构建了BCL2L11 3′UTR野生型和突变型载体，以及miR-665 mimics和对照组，将其共转染到HEK293T细胞，通过使用双荧光素酶报告基因检测系统鉴定了miR-665与BCL2L11存在靶向性关系。在山羊成肌细胞转染miR-665 mimic及阴性对照，采用RT-qPCR检测了细胞凋亡标志因子XIAP和Fas表达水平，同时利用EdU试验分析miR-665过表达对山羊成肌细胞增殖的影响。结果表明，BCL2L11在背最长肌组织中高表达；miR-665和BCL2L11在9月龄和1月龄山羊背最长肌组织中表达情况存在差异，miR-665在1月龄的表达量高于9月龄，而BCL2L11则相反，两者存在负调控现象；通过双荧光素酶报告分析显示，当转染过表达miR-665 mimic后，显著抑制了BCL2L11荧光素酶的活性，同时靶基因BCL2L11的mRNA表达水平也明显降低。为进一步验证miR-665的功能，转染miR-665 mimic后发现细胞凋亡标志基因XIAP与Fas的表达量也显著降低；EdU试验分析显示，过表达miR-665后促进了成肌细胞的增殖。综上所述，在山羊背最长肌组织中miR-665作为BCL2L11的调控元件，能够显著抑制山羊成肌细胞中BCL2L11的表达水平，当miR-665过表达后，能够促进成肌细胞的增殖情况。