碱韭总黄酮通过m6A-IGF2BP2依赖性途径促进宫颈癌细胞凋亡的机制研究

宫颈癌（cervical cancer, CC）是妇科恶性肿瘤，大部分黄酮类化合物具有抗宫颈癌活性，然而碱韭（Allium polyrhizum）总黄酮是否也具有抗宫颈癌活性鲜少报道。为揭示碱韭总黄酮对宫颈癌细胞的作用及机制，本研究利用CCK-8 （cell counting kit-8）实验、划痕实验、流式细胞术、实时定量PCR、免疫印迹、斑点杂交、N6-甲基腺苷（N6-methyladenine, m6A）定量、甲基化RNA免疫共沉淀（methylated RNA immunoprecipitation, MeRIP）和RNA免疫共沉淀（RNA immunoprecipitation, RIP）等方法，对碱韭总黄酮处理的宫颈癌细胞生长能力进行检测，发现碱韭总黄酮对HeLa、SiHa和CaSki 3种宫颈癌细胞有不同程度的抑制作用，可有效抑制其增殖和迁移能力，同时促进HeLa细胞凋亡。碱韭总黄酮处理HeLa细胞后显著上调其促凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（B-cell lymphoma-2 associated X protein, BAX）的表达，全基因组m6A修饰水平显著上升，且与m6A去甲基化酶脂肪量和肥胖相关蛋白（fat mass and obesityassociated protein, FTO）表达显著下调有关；此外，m6A读取蛋白胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2（insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 2, IGF2BP2）的表达显著上调。生物信息学预测发现，BAX m RNA上有1个极高可信度的m6A修饰位点，而IGF2BP2与此位点结合；同时，m6A抗体和IGF2BP2抗体均能够显著富集BAX mRNA。综上，本研究证明碱韭总黄酮具有良好的抗宫颈癌活性，且可能通过m6A-IGF2BP2相关分子机制促进宫颈癌细胞凋亡而发挥抗癌作用。本研究结果可为黄酮类化合物抗肿瘤机制的相关研究提供理论基础，也为新型药物的开发与应用提供一定的理论参考。