山萘酚逆转肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu的作用机制研究

目的 探讨山萘酚（KAE）对肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu功能的影响。方法 采用KAE处理Bel-7402/5-Fu细胞，将细胞分为对照组和药物组（0.064、0.320、1.600、8、40、200μmol/L KAE）；根据干扰DNA依赖性激酶催化亚基（DNA-PKcs）、加入蛋白酶体抑制剂MG132或加入自噬抑制剂CQ，将细胞分为si-NC组和DNA-PKcs干扰（siRNA-1664、siRNA-2142、siRNA-3785）组，对照组、KAE组和KAE+si-DNA-PKcs组，对照组、KAE+DMSO组、KAE+MG132组和KAE+CQ组。采用CCK-8检测细胞增殖，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western blot检测组蛋白H2AX磷酸化（γ-H2AX）、DNA-PKcs、DNA双链断裂修复/V（D）J重组蛋白（Artemis）和药泵基因（P-gp）mRNA和蛋白的表达，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡，蛋白稳定性实验检测DNA-PKcs蛋白稳定性，免疫共沉淀检测DNA-PKcs蛋白泛素化。结果 与对照组相比，8μmol/L KAE处理细胞24 h可抑制约50%的细胞增殖能力，选择此时间和浓度进行后续研究。与对照组相比，KAE组γ-H2AX mRNA和蛋白表达水平升高，DNA-PKcs、Artemis和P-gp mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）；与对照组相比，KAE促进Bel-7402/5-Fu细胞周期阻滞于G2/M期，增加细胞凋亡；与si-NC组相比，siRNA-1664能显著下调DNA-PKcs mRNA和蛋白表达水平（P<0.05）；与KAE组相比，KAE+si-DNAPKcs组进一步促进了KAE对细胞的效应；与对照组相比，KAE+DMSO组DNA-PKcs蛋白表达水平降低（P<0.05）；与KAE+DMSO组相比，KAE+MG132组DNA-PKcs蛋白表达水平升高（P<0.05），而KAE+CQ组DNA-PKcs蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）；与对照组相比，KAE+DMSO组促进DNA-PKcs蛋白的泛素化，而KAE+MG132组则可抑制其泛素化（P<0.05）。结论 KAE能够诱导肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu的细胞凋亡和细胞周期阻滞。